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Re: [escepticos] (OFF TOPIC) : cultivo celular de osteoblastos

| En un artículo sobre la síntesis de microeseferas de alginato cálcico se
| realiza un estudio de citotoxicidad, pero es que no me queda muy claro
| el procedimiento, ¿algún alma caritativa me puede explicar (un poco por
| encima,no hace falta profundizar) qué es lo que han hecho? Aquí pongo el
| fragmento en cuestion que me interesa aclarar:
|
| "A MTS colorimetric assay, based on the reduction of a tetrazolium salt
| to formazan by active cell dehydrogenases, was performed. Cells were
| preincubated for 24 h in DMEM, and plated for 24 h in culture medium
| supplemented with various amounts (0–100%) of solutions (soaking
| solutions) prepared by soaking microcapsules (50 mg in 5 ml of the
| culture medium) or copper cylinders (three cylinders of 1.2 cm in
| diameter and 0.6 cm in height, in 5 ml of the culture medium) for 24 h
| in DMEM. The copper cylinders were used as positive controls for
| cytotoxicity, as usually done in cytotoxicity studies conducted with
| osteoblasts (Josset et al., 1999). This assay was triplicated."
|
| Desde ya, muchas gracias
|
| Saludetes


Es un ensayo de citotoxicidad in vitro bastante estandarizado, existen muchas versiones similares (basadas en MTT, XTT, WST-1, ect).

Casi todos ellos se basan en la capacidad de las deshidrogenasas mitocondriales de reducir estas sales de formazan, lo que provoca un cambio de color cuantificable con un espectrofotómetro. EL proceso es dependiente del número de células y de su actividad metabólica, por lo que puede estimarse el estímulo o inhibición de distintos compuestos sobre las células de un modo bastante sencillo.

En el caso que se comenta arriba, el diseño experimental parece pretender testar la toxicidad de unas microcápsulas. Se prepara a unas células precursoras de hueso (osteoblastos) (un modelo celular como otro cualquiera, a no ser que se haga a propósito porque las microcápsulas que se testan sean material apto para implantes en hueso), por un lado, en un medio de cultivo habitual como DME, y por otro se preparan las cápsulas, haciendo una suspensión que se equilibra en el mismo medio de cultivo. Se preparan también unos cilindros de cobre, de conocidos efectos citotóxicos sobre estas células, para tener un control positivo de toxicidad. FInalmente las células se incuban con concentraciones variables de las microcápsulas y de los cilindros de cobre de control positivo. Se incuba uin período, se añade la sal MTS, y se cuantifica el cambio de color de la sal de tetrazolio. Una vez corregidos y normalizados los valores, la citotoxicidad de cada concentración de microcápsulas se estimará como el inverso de la absorbancia, usando los valores de los cilindros de cobre como referente.

Espero que se entienda bien. Yo he utilizado bastante estos tests, aunque no para citotoxicidad sino para proliferación celular (es exactamente igual, sólo que la interpretación de resultados es la opuesta)., Salud,

marmi